实验室常用生化试剂配方

2020年12月3日发(作者：吴仪)
实验室常用生化试剂配方

1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版）
抗生素
英文名称及缩写
抗性基因
贮藏液浓度(mgml) 100
25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35
25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配)
50 50
MM
使用终浓度（μgml） 链霉菌
2CM
YEME
大肠杆菌
LA或LB
氨苄青霉素 氯霉素 潮霉素 卡那霉素 壮观霉素 链霉素 硫链丝菌素 红霉素 阿泊拉
霉素 紫霉素 萘锭酮酸 TMP
Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km
Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery
Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim
cat hyg aacaph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph
－* 10 10 2 5 10 5 100 10
－ － 25 25 20 25 10 － 50
－ － － － － － 2.5 － 5
50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30
注意事项：
(1) – 表示无记录或不能使用 ，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请
确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装；
（2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并
设置阴性对照；
（3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有< br>些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio
（4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并
分装； 氯霉 素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确
保配制贮存液所用溶剂（ 无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水
乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA 时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易
挥发，有剧毒；
（5）长 期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保
存，经常使用时可以暂置 于4℃保存；
（6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整；
(7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次
性橡胶手套及口罩 ，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂
对自身的损伤及对工作环境的污染 。
注意事项：
(1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓 冲液配制，缓冲液配制方法
参考《分子克隆实验指南（第3版）》：
蛋白酶 K缓冲液 ：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液 ：TE
（pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA； 溶菌酶缓冲液 ：10 mM Tris-HCl（pH
8.0）；
(2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水
浴处理5 min后再使用；
（3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌；
（4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界
污染。
（1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃；
,
（2）X-Gal用N-N- 二甲基甲酰胺（DMF）配制，无需过滤除菌，X-Gal易见光分解，
配制过
,
程中尽量避开强光，分装到离心管后用锡箔纸包好，避光保存于-20℃；N-N-二甲基甲酰胺有剧毒，挥发性较强，应在通风良好的台面操作，配制时请穿工作服，戴一次性橡
胶手套及
,
口罩，及时清理配制时使用的台面及器具，以避免N-N- 二甲基甲酰胺对自身的损伤及
对工作环境的污染。