阑尾炎不能吃什么实验16酶的特异性和影响酶反应速度的因素

2020年11月20日发(作者：任继愈)


实验16 酶的特异性和影响酶反应速度的因素
一、目的
1、了解酶的特异性。
2、了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响。
3、掌握检查酶的特异性，酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理。
4、学习测定酶最适pH值的方法。
二、原理
酶是生物体中具有催化功能的蛋白质 ，因此也叫生物催生剂。生物体内存在多种多样的酶，
从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生 物化学反应。
酶具高度的特异性。所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用，而 不
能对别的物质发生催化反应。
淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦 芽糖，但不能催化蔗糖水解。
蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解， 用Benedict试
剂检查糖的还原性。
温度和pH对酶的活性有显著的影响，使反应速度 达最大反应值时的温度称为某种酶作用的
最适温度。大多数动物酶的最适温度为37℃~40℃，植物酶 的最适温度为50℃~60℃，能使
酶表现其活性最高时的pH值称为该酶的最适pH值，不同酶的最适 pH值不同。
酶的活性常受某些物质的影响，能使酶活性增加的物质称为酶的激活剂，能使酶的活性降 低
的物质称为酶的抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
三、材料、试剂与器具
（一）材料
1、干酵母
2、黄豆粉
（二）试剂
1、2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标 准，则呈现
还原性，这种蔗糖不能使用，所以实验必须进行检查，本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试< br>剂。
2、0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（新配制）。
3、释释200倍的新鲜唾液（5滴唾液，加蒸馏水稀释至50毫升）。
4、蔗糖酶溶液：取 干酵母100克，置于乳钵内，加适量的蒸馏水和少量石英砂，用力研磨
提取1小时，再加蒸馏水使总体 积约500毫升，过滤，将滤液保存于冰箱备用。
5、本尼迪克特试剂（Benedict）：将硫酸 铜17.3克溶于100毫升热蒸馏水中，冷却，稀释至
150毫升，取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠 （Na2CO3）100克，加水600毫升，加热使之溶
解，冷后后稀释至850毫升。最后把硫酸铜 溶液缓缓倒入柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，摇匀，
用细口瓶贮存，此试剂可以保存很久。
6、0.1%淀粉溶液。
7、1%氯化钠溶液。
8、1%硫酸铜溶液
9、1%的硫酸钠溶液
10、碘化钾—碘溶液（稀）。
11、0.3%氯化钠0.2%淀粉溶液。
12、1%尿素溶液
13、脲酶提取液 ：取黄豆粉6克，加30%乙醇250毫升，振荡10分钟，过滤，可保存1~2
星期。
14 、奈斯勒试剂：称取5克碘化钾，溶于5毫升蒸馏水中，加入饱和氯化汞溶液（100毫升
约溶解5.7 克氯化汞）并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时，再加40毫升50%氢
氧化钠溶液，稀释10 0毫升，混匀，静置过夜，倾出清液于棕色瓶中。
15、0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新配制）
16、0.2M磷酸氢二钠溶液
17、0.1M柠檬酸溶液
（三）器具
1、试管及试管架
2、移液管（1，2，5毫升）
3、冰浴
4、恒温水浴
5、白瓷板
6、秒表
四、操作步骤
（一）酶的特异性
1、淀粉酶的特异性实验
取试管6支，编号，按下表进行操作
管号

1

2

3

4

5

6


1%淀粉溶液（滴）

4


4


4



2%蔗糖溶液（滴）


4


4


4


稀释唾液（ml）



1

1




煮沸过的稀释唾液（ml）





1

1


蒸馏水（ml）

1

1






37℃恒温水浴15分钟
Benedicty试剂（ml）

2

2

2

2

2

2


沸水浴2~3分钟
现象








解释结果








2、蔗糖酶的特异性实验
取试管6支，编号，按下表进行操作
管号

1

2

3

4

5

6


1%淀粉溶液（滴）

4


4


4



2%蔗糖溶液（滴）


4


4


4


蔗糖酶溶液（ml）



1

1




煮沸过的蔗糖酶溶液(ml)





1

1


蒸馏水（ml）

1

1






37℃恒温水浴15分钟
Benedict 试剂(ml)

2

2

2

2

2

2


沸水溶2-3分钟
现象








解释结果








（二）酶的激活剂及抑制剂
取试管4支，编号，按下表加入试剂
管号

1

2

3

4


0.1%淀粉溶液（ml）

3

3

3

3


稀释唾液(ml)

1

1

1

1


1%硫酸铜溶液(ml)

1





1%氯化钠溶液（ml）


1




1%硫酸钠溶液(ml)



1



蒸馏水(ml)




1


37℃恒温水浴、保温10分钟
碘化钾——碘溶液（滴）

2~3

2~3

2~3

2~3


现象






解释结果






说明本实验第3管的意义。
（三）温度对酶活性的影响
1、温度对唾液淀粉酶活性的影响
唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及 麦芽糖。它们遇碘各呈不同的颜
色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色，糊精按分子从大到小的顺序 遇碘可呈蓝色、紫
色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈颜色。由于不同温度下唾液淀粉酶的 活性
高低不同，则淀粉被水解的程度不同。所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现颜色来判断。
取3支试管，编号后各加0.3%氯化钠的0.2%的淀粉溶液2毫升。将第1、2号试管放入37℃
恒 温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第1号试管中加入煮沸5~15
分钟的稀释唾 液1毫升，向第2，3号试管加稀释唾液各1毫升。摇匀。20分钟后取出3支
试管，各加入碘化钾—碘 溶液2滴，混匀，比较各管溶液的颜色。判断淀粉被唾液酶水解的
程度，并说明温度对唾液酶活性的影响 。
2、温度对脲酶活性的影响
脲酶能催化尿素水解生成氨和二氧化碳，氨可以与奈斯勒试剂 作用生成红色化合物。由颜色
深浅可断定反应进行的程度。
NH2
NH2

脲酶
C=O+H2O——→2NH3+CO2



奈斯勒试剂碘化双贡铵（橙黄色）
取4支试管，编号，向每支试管中加入脲酶提取液1毫升。 将第1号试管放在冰水里冷却，
第2号试管在室温上放置，第3号试管在50℃恒温水浴中保温，第4号 试管在沸水中煮。5
分钟后分别向4支试管中加入1%尿素溶液1毫升，混匀，10分钟后取出4支试管 ，将第3，
4号试管用流动的自来水冷却至室温。然后向4支试管中加入奈斯勒试剂5滴，摇匀。观察< br>比较各试管颜色深浅，并说明温度对脲酶活性的影响。
（四）pH对酶活性的影响
（ 一）取4个50毫升锥形瓶，编号。按下表中的比例，用吸量管添加0.2M磷酸氢二钠溶
液0.1M柠 檬酸溶液，制备pH5.0~8.0的4种缓冲液。
编号

0.2M磷酸氢二钠
Na2HPO4(毫升)

0.1M柠檬酸
C6H8O7H2O(毫升)

缓冲液pH


1

5.15

4.85

5.0


2

6.05

3.95

5.8


3

7.72

2.28

6.8


4

9.27

0.28

8.0


从4个锥形瓶中各取缓冲缓3毫升，分别放入4支带有号码的试 管中，随后于每个试管中添
加0.3%NaCl 0.5%淀粉溶液2毫升和稀释200倍的唾液2毫升 ，向各试管中加入稀释唾液的
时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，并依次置于37℃恒温水浴中保 温。
待向第4管加入唾液2分钟后，每隔1分钟由第3管取出1滴混合液，置于白瓷板上，加1
小滴碘化钾—碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加
1—2滴碘 化钾—碘溶液，加碘化钾—碘溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。
观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
五、实验报告
以表格的形式总结酶的特异性及各种因素对酶促仅应的影响，并解释结果。
六、思考题
1、什么是酶的特异性？本实验结果为什么能说明酶具有这种性质？
2、用煮沸后的 蔗糖酶水解淀粉或蔗糖会产生什么现象？这种试验与操一(一)的作法有
何区别，试说明酶学实验中安排 对照实验的必要性。
3、激活剂与变性剂有何不同？试举例说明。
4、抑制剂与变性剂有何不同？试举说明。
5、为什可以用碘化钾—碘溶液作指示剂检查温度对唾液淀粉酶活性的影响？
6、酶在干燥的 情况下与在水溶液中，它的活性受温度的影响是否相同？这种性质对酶的保
存有何意义？
7、 酶反应的pH是否是一个常数？它与哪些因素有关？这性质对于选择测定酶活性的条件
有什么意义？
8、通过几个酶实验，你对下面问题如何认识？
（1）酶作为生物催化剂具有哪些特性