学习小组组名菌群失调

2020年11月16日发(作者：李耀)
以便培养结果判定是否为菌群失调是不科学的,因为粪便中大约有500种左右的细菌,绝大多
数为专性厌氧菌，包括双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌、消化链球菌等，也有少量的兼性厌
氧菌、专 性需氧菌和微需氧菌，如肠杆菌属细菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母样菌等.这些细菌绝大
多数是无法用常 规的便培养方法(麦康凯和SS)培养出来的.要培养这些细菌需要十几种甚至几十
种培养基，且鉴定过 程复杂，耗时长(约2年左右).
目前多数以涂片,革兰染色后,通过显微镜观察细菌形态的方法估计菌群的状况.



胃肠微生态学检测方法及临床意义

胃肠微生态系是人体微生态学的重要 组成部分，了解其不同部位的微生态学状况，应采取不同部位的标
本进行检验，可采用插管法和剖腹手术 时采取标本，但由于采样方法繁琐，患者依从性差，一般不予采
用。以粪便菌群作为评估胃肠道生态状况 的指标，由于其标本易得，已成为目前普遍采用的方法。

事实上，粪便微生物群落的变化，是 由微生物本身、宿主及宿主外环境等多种因素综合作用形成的，它
并不是大肠以上各生态系的简单汇总， 却又与各生态系菌群的变化有着千丝万缕的联系。粪便的微生物
群落，在定性和定量上都是恒定的，不同 年龄、不同饮食和不同种族均不会使其发生质的变化。只有当
宿主处于病理状态时，尤其是发生胃肠道疾 病时，才会使粪便菌群出现异常。

粪便干重的13~25由细菌组成，其数量巨大，种类繁 多，大约有500种左右的细菌
「
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」
。在常见的十几
种细菌中，绝 大多数为专性厌氧菌，包括双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌、消化链球菌等，也有少
量的兼性厌氧菌 、专性需氧菌和微需氧菌，如肠杆菌属细菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母样菌等。

目前分析检测粪便中细菌数量和种类（也称为肠道菌群分析）的方法很多，总体可归纳为以下3大类。

1 培养法

此法将新鲜粪便直接接种于多种不同的培养基上，对生长出 来的菌落进行鉴定（一般鉴定到种）。通过
控制接种粪便重量的方法可以对肠道菌群进行定量培养。将每 种细菌的数量与参考值进行比较，或计算
BE（双歧杆菌肠杆菌）值，即可评估肠道菌群的状况。BE值 〉1表示肠道菌群组成正常，〈1表示肠
道菌群失调，值越低失调越严重
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」
。

由于粪便中的细菌种类繁多，即使仅培养有意义的细菌，也需要十几种甚至几 十种培养基，且鉴定过程
复杂，耗时长。因此，此种方法常用于肠道菌群方面的科学研究，而不适于临床 常规检验
2 分子生物学方法

即使使用了最先进的培养方法，我们用光学显微镜直 接观察到的细菌中，也有40%～80％是不能培养出
来的，那么只能用分子生物学的方法证实其存在。 目前，在肠道菌群的研究领域，用于研究的新技术，
如：16SrRNA基因的

作者单位：中国医科大学附属第二医院检验科（110004）

E-mail：jykjxz@

聚合酶链反应、变性梯度凝胶电泳、脉冲场凝胶电 泳、荧光原位杂交技术等
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、
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」
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3
、
4
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。

。

3 镜检法
镜检法是目前广泛采用的进行肠道菌群分析的方法，由于所需设备简单，操作简便，耗时短，很适宜临
床应用。该方法是通过油镜观察革兰染色粪便涂片的菌群像，估计细菌总数、球菌与杆菌比例，革兰阳
性菌与革兰阴性菌的比例，结合各种细菌的形态特点、有无特殊形态细菌增多等结果来综合判断菌群状
况 。

3.1粪便涂片的制作 取一洁净载玻片，在新鲜粪便上多处沾取标本，以30°~40 °的角度，匀速推片于洁净
的载玻片上，使其厚度与血膜相似。推片用后立即用清水冲洗，并置于消毒剂 中消毒后，才可继续使用。


取标本时应注意粪便的颜色、性状，是否有膜状物，遇 黏液便、胨样便或水样便，可用便签直接涂片或
滴注涂片，涂片可稍厚。

3.2染色方法 革兰染色法，阳性菌染成紫色，阴性菌染成红色，合格涂片中阳性菌和阴性菌要对比鲜明。


3.3显微镜检查方法

3.3.1观察细菌总数 观察菌群涂片时首先要计数细菌 总数，这是肠道菌群是否处于平衡状态的一个重要
指标。没有必要对细菌数进行准确计数，初学者可以先 计数部分（如18视野）油镜视野中细菌的数量，
再对整个视野进行估计，观察几个视野后取平均值。一 般来说，每视野细菌数在501~5000个为正常，1
01~500个为轻微减少，11~100个为 明显减少，10个以下为显著减少，也有高于5000的情况，但较少见，
临床意义不大。细菌总数减少 则与肠道菌群失调存在密切关系，应引起重视，并结合细菌类别构成等指
标进行综合评估。

3.3.2细菌类别构成 仅仅计数细菌总数并不能完全反映肠道菌群的状态，细菌种类及数量与粪便性 状和
胃肠道功能有着密切的联系，而且正常粪便中常见细菌的构成是基本恒定的，不受稀释和浓缩的影响 。
因此粪便中细菌类别构成是更有意义的指标。

由于通过涂片镜检的方法无法精确 区分细菌种类，一般就细菌形态和染色性将细菌分为4大类，即革兰
阳性杆菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性 球菌、革兰阴性球菌，通过计算4者的比例来评估肠道菌群的特征。


具体计数方法 为：计数1000个细菌中各类细菌的百分率。可先计数部分视野中（如18视野）各类细菌
数，然后估 计全视野中的各类细菌数。

由于正常粪便中数量最多的细菌如双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、 拟杆菌等均为革兰阳性杆菌，因此，革
兰阳性杆菌在正常粪便中所占的比例最大，其次为革兰阴性杆菌。 各类细菌随年龄改变会有一些变化，
尤其是婴幼儿期，革兰阳性杆菌所占比例在出生后会逐渐增多，至半 岁时达最高，以后逐渐下降。成人
时期，革兰阳性杆菌与革兰阴性杆菌的比例约为3:1左右。革兰阳性 球菌和革兰阴性球菌的量较少，只
占总数的5%~20%。40 岁以后，阳性杆菌逐渐减少，阴性杆菌 逐渐增多。60岁以后，两类细菌的数量
趋向于接近，阳性杆菌只略多约5%~10%，此时阳性球菌和 阴性球菌只占5%~15%的比例。详细的各年
龄细菌比例参考值见表1
「
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」
。

3.3.3特殊形态细菌 有时会在粪便菌群涂片中，看到一种非正常细菌明显 增多，甚至占绝对优势，如酵
母菌、葡萄球菌和艰难梭菌，这些菌是严重的假膜性肠炎和真菌性肠炎的病 原菌，应引起高度重视。

3.4 结果报告方式及临床意义 肠道菌群的报告方式有2种，即比例法和分度报告法

3.4.1比例法 以球菌与杆菌比例 的方式报告，简称球杆比，参考值为1:3（成人）。也可直接报告“革兰阳
性杆菌:革兰阴性杆菌：革 兰阳性球菌:革兰阴性球菌”的比例（直接比例法），如60：34：5：1，参考范
围见表1。

如结果在参考范围内，则表明菌群正常，如果球杆比＞13，表明菌群失调，比值越大，失调 越严重，可
出现比例倒置。菌群失调时，直接比例法的后2个或3个比值会升高，第1个比值下降，这种 变化越严
重，表明菌群失调越严重。

3.4.2 分度报告法 根据涂片中细菌的 总数，菌群中细菌的构成比例，有无特殊形态细菌增多等情况，结
合患者的年龄、粪便性状、使用抗生素 状况等综合分析，将失调程度分为3度，具体参考标准见表2。

表2 菌群失调分度报告的依据（参考标准）


涂片结果

粪便外观

临床意义

Ⅰ度菌群细菌总数在正常范围，正常低值，或略有减可以是正 常为潜伏型，较轻的菌群失调，临床症
失调症

少。革兰阳性杆菌在正常低值，革兰 阴性杆成形软便，或状不明显，可逆，即只要去除病因，
菌多有增加，革兰阳性球菌在正常高值或略不成 形软便不经治疗也能恢复。

增多，类酵母样菌，梭菌未见或极少量。总或稀便。

之，仅是数量和比例轻度改变。

Ⅱ度菌群细菌总数明显减少或无明显改变，偶见部 分多为程度不为局限型，中度的菌群失调，不可逆，
失调症

病例细菌显著减少。革 兰阳性杆菌明显减等的稀便，也不经治疗难以自然恢复。临床有慢性
少；革兰阴性细菌明显增多，有时达 90%可为黏液便，病的表现，如慢性肠炎，慢性痢疾，
以上，有的病例革兰阳性球菌增多（常见有水样 便，脓血溃疡性结肠炎，肾盂肾炎等。Ⅱ度菌
葡萄球菌、链球菌），杆菌和球菌比例倒置样便或柏油群失 调需要积极治疗，协助患者恢复
（正常值约为75：25左右），类酵母菌或样便。

梭菌明显增多。总之，粪便菌群已有明显改
变。

Ⅲ度菌群细菌总数呈明显 减少。粪便中原来的菌群大多为程度不为弥漫型，严重的菌群失调，又称二
失调症

部分成员被抑制，只有一种细菌或真菌占绝等的稀便，也重感染。主要表现急性腹泻与肠功能
菌群平衡状 态。

对优势，最常见有葡萄球菌、白色念珠菌、可为黏液便，紊乱。由葡萄球菌和艰难梭菌 引起的
致病性大肠杆菌、艰难梭菌，铜绿假单胞菌常呈黄绿色假膜性肠炎，真菌性肠炎可伴有电解
和肺炎克雷伯菌等。总之，原菌群中的某一或黑色，有时质失衡、低蛋白血症，病情重或凶险。
种少数 菌成为菌群的绝对优势菌是Ⅲ度菌可见膜状物。 Ⅲ度菌群失调的病人必须及时积极

群失调症的主要特点，应同时做粪便细菌的
分离和鉴定。

治疗，挽救病人生命。