老张家骨筋痛贴黄芪甲苷的含量测定研究进展

2020年11月15日发(作者：贾醒卿)
黄芪甲苷的含量测定研究进展
摘要 黄芪甲苷是中药黄芪的主要有效成分，含量测定方法较多 ，其测定方法主
要有高效液相色谱法、薄层扫描法、荧光法等。
关键词 黄芪甲苷 含量测定 研究进展
黄芪为常用中药,性温,味甘,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能,用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泄脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水
肿、久溃不敛、慢性 肾炎、蛋白尿、糖尿病等症
[1]
。现代药理研究表明,黄芪具有
器官保护、免疫调节 、强心、降糖、抗衰老、抗炎抗病毒等作用
[2]
。近年来，对
黄芪甲苷的含量测定方 法的研究很多，本文就几种常用方法进行介绍。
1.高效液相色谱法(HPLC法)
HPL C法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷所
产生的的含量测定、稳定性、 药理和临床研究中。
1.1HPLC-UV法：黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收λmax =200.08nm,
紫外检测灵敏度低，干扰因素多
[3]
，目前HPLC法是最常 用的检测器是紫外检测
器,闵庆璐等
[4]
采用HPLC- UV法测定丹黄祛瘀片中黄芪甲苷的含量，色谱柱为
Kromasil C18 柱（250mm×4. 6mm）,流动相乙腈-水(32:68)，流速1.0mlmin,检测
波长203nm。结果线性范 围0.066~0.330mgml(r=0.9993)回收率为95.0%~105.0%,
平均回 收率100.1%（RSD=2.0%，n=9）。
1.2HPLC-示差折光检测法： 由于黄芪甲 苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂
噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。池玉梅等
[ 5]
应用HPLC- 示差折光检
测法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersil ODS 2（4.6 mm×
200mm,5μm）,流动相为甲醇-水（67:33），结果线性范围1~5μgml,回收 率为
98.1%，RSD为2.02%。该方法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确可靠。
[6]
1.3RP-HPLC法：翟海云等采用RP- HPLC法测定复方补气养血口服液中黄芪甲苷
的含量，色谱柱Agilent C18（150mm× 4.6mm,5μm）,流动相乙腈-水（60:40），
流速1.0mlmin，检测波长203nm 。结果黄芪甲苷的线性范围为0.34~3.40μg
（r=0.9999）,平均加样回收率为100 .8%（n=6）,RSD为1.47%。该方法简便可行，
重复性好，可用于复方补气养血口服液中黄 芪甲苷的含量测定。贺福元等
[7]
采用
反向高效液相色谱法对大鼠血浆补阳还五汤中 黄芪甲苷的含量进行了测定，并进
行了药动学研究。采用C18柱（4.6mm×250mm,5μm） ，检测波长：203nm,流
动相：乙腈-水（35:65），结果血浆样品中黄芪甲苷的线性范围为2 .4~12μ
g,r=0.9996,回收率为100.2%，RSD为1.100%。该法快速、简便 、准确。
1.4HPLC-ELSD法：HPLC-ELSD法的原理是恒定流速的洗脱液进入检测器 后，首先
被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室，流动相及低沸点的组分被蒸发，
剩下 高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电
管接收形成电信号，散射光由 光电倍增管收集得到响应。响应大小决定由被分析
物质的颗粒的数量和大小，而不受流动相溶剂的干扰； 不要求被检测组分有特定
的化学结构
[8]
。金平等
[9]
采用HP LC-ELSD法测定黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量。
采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6mm×25 0mm,5μm），流动相：水：乙腈（68:32），
漂移管温度80℃，流速2.7Lmin。结果 黄芪甲苷为1.112~6.672μg时呈良好的
线性关系，平均回收率为99.56%（RSD=1 .67%）3批样品每片含黄芪甲苷均在
2.00mg以上。结论该方法准确可靠、重现性好、可用于黄 芪泡腾片中黄芪甲苷
的含量测定。王鹏等
[10]
采用高效液相色谱-蒸发光散射测定 蒙古黄芪中黄芪甲苷
的含量，以黄芪甲苷的含量为指标，采用正交设计法选取影响提取的因素如超声时间、溶剂总用量、甲醇和氨水的比例及提取次数进行考察，对醇- 氨提取方法
进行了优选。色谱柱为Diamonsil C18（4.6mm×250mm,5μm）, 流动相：A相为
乙腈，B相为水，梯度洗脱。A相随时间的变化为：5%（0~5min），6%~25 %（5~15min,
线性）,26%~30%（15~20min,线性），31%~40%（20~ 40min,线性）；流速：1.0mlmin;
柱温25℃；ELSD检测器漂移管温度:60℃，气 流速为2.0mlmin。结果黄芪甲苷
在7.5~750μgml范围内线性关系良好（r=0.99 85）,平均回收率为98.0%~102.0%
该方法适用于黄芪中黄芪甲苷的含量测定。
1.5柱前衍生化HPLC法：黄芪甲苷在黄芪中含量较低 ,使采用直接HPLC法在 203
nm处测定黄芪甲苷的含量干扰多而准确度低 ,给定量分析带来一定困难。姚美
村等
[11]
采用柱前衍生化 HPLC法 ,对黄芪甲苷分子的羟基进行苯甲酰化反应 ,使
最大吸收波长移至 230 nm处 ,提高了分离选择性和检测灵敏度 ,实现了对样品
中干扰物质的分离和黄芪甲苷的定量分析。以吡啶 - 苯甲酰氯 ( 2. 5∶1)为衍生
化试剂 ,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化。色谱柱：Spherisorb ODS C18
柱 ( 4. 4× 250 mm , 5μm)，以甲醇 -四氢呋喃-水 ( 90：4：6, 0. 2% 三乙胺 )
为流动相 ，检测波长230 nm。结果黄芪甲苷在0. 004～ 0. 080mgmL范围内呈
线性 (r= 0. 9999),平均回收率为 94. 7% 。该法衍生化反应条件温和 ,产物稳定 ,
样品进样前处理简单 ,内标物选择适当 ,是一个较好的黄芪质量控制方法。该法
准确 ,灵敏度高 ,重现性好 ,为中药黄芪质量评价提供了现代化的科学依据。
1.6HPLC- MS法：高效液相一质谱（HPLC-MS）联用仪是当前天然药物的成分、药
理与临床研究中最重要的 联用仪器，能解决复杂成分样品的定性、定量问题。王
锐等
[12]
采用HPLC- MS-MS测定兔血浆中黄芪甲苷的含量，采用Agilent SB-C18柱
（4.3mm×150 mm,5μm)；流动相为甲醇-5.0mmolL乙酸水（75:25）；流速为
0.8mlmin; 柱后2:1分流，三分之一流出液进行质朴检测。采用离子阱质谱多级
反应模式，黄芪甲苷选择mz80 7.4→627.2为离子对，内标法测定含量。结果表
明血浆中黄芪甲苷的检测限为0.1ngml。 线性范围为0.5~50.0μgmL，平均方法
回收率在96.3%~104.7%范围内。该方法具 有灵敏度高、稳定性好和快速的特点,
符合生物样品的分析要求,有望用于黄芪甲苷的药代动力学和组织 分布研究。
2.薄层扫描法（TLCS法）
薄层扫描法是指用一定波长的光照射在经薄层层 析后的层析板上，对具有吸收或
能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以 检测层
析谱。对于中成药复方制剂，亦可用相应的原药材按需要组合作阴、阳对照，然
后比较其 薄层扫描图谱加以鉴别
[13]
。张丽等
[14]
用双波长薄层色谱扫描法测 定复
方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量。采用硅胶G板，以氯仿：甲醇：水（7:3:1）混
合液放 置过夜的下层液为展开剂，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液后105℃
加热显色至斑点显色清晰。 采用双波长扫描λS=530nm,λR=700nm;反射线性扫
描，结果薄层色谱斑点清晰，黄芪甲 苷在1.000~7.000μgml范围内线性关系良
好，加样回收率97.31%，RSD=1.8 5%（n=6）。该方法简单、有效、专属性强,精
密度和回收率较高,能够准确地测定黄芪甲苷的含量 。
3.荧光法
3.1大茴香酸-硫酸体系荧光法：杨连梅等
[15]
利用 大茴香酸在硫酸介质中与黄芪甲
苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量。结果黄芪甲苷 与茴香
酸的反应产物的最大激发波长为Ex=320nm,最大发射波长Em=387nm. 黄芪甲苷
在1.0～8.0μgml其浓度与荧光强度呈良好的线性关系。平均回收率为97.22%，
RSD=2.31%（n=5）。该方法灵敏度高,选择性好,结果无干扰,可广泛应用于黄芪药
材的质 量控制。游文玮等
[16]
采用荧光分光光度法，针对大鼠血清中内源性杂质干
扰严重 的特点，用固相萃取净化和富集血样，再用化学衍生荧光分光光度法测定
黄芪甲苷的含量。最大激发波长 Ex=310nm,最大发射波长Em=376nm, 黄芪甲苷
在1~10μgml(r=0.999 9)浓度范围内与荧光强度呈线性关系平均回收率为97.1%，
RSD=2.6%(n=5)。此方法 灵敏准确选择性好，可用于测定大鼠血清中黄芪甲苷。
3.2香草醛-磷酸体系荧光法：韩素琴等[17]
利用黄芪甲苷与香草醛在一定条件下反
应产生较强的荧光建立了香草醛-磷酸体系 荧光分光光度法测定黄芪甲苷的方法。
结果黄芪甲苷与香草醛的反应产物的最大激发波长为Ex=365 nm,最大发射波长
Em=430nm。黄芪甲苷在1.0~20mgL范围内荧光强度与浓度呈线性关 系，检测限
为0.106μgml,回收率为95.97%~102.1%。该法具有灵敏度高、检出限 低、直接
测定、无干扰等优点。对黄芪口服液中黄芪甲甙含量的测定,结果理想。
3.3香草醛-硫酸体系荧光法：邴建生等
[18]
利用在硫酸条件下香草醛与黄芪甲 甙的
荧光反应测定黄芪口服液中的黄芪甲苷。结果黄芪甲苷在0.0~30.0mgL范围内
呈 良好的线性关系，最低检测限为0.3μgml。黄芪甲苷与香草醛反应产物的最
大激发波长为Ex=3 68nm,最大发射波长Em=435nm。回收率为96.72%~103.30%。
综上所述 ，对黄芪甲苷的分析方法很多，但大多数制剂由于成分复杂，干扰严
重，HPLC法和TLCS法因操作 简单、快速、灵敏度高、重现性好而优于其他方法。
近年来，随着新型检测器如ELSD等的不断出现， 使原本无紫外吸收的黄芪甲苷
也得以很好的分离；而将色谱与质谱联用（如 HPLC-MS），化学衍 生化与荧光相
结合，则各取所长，能同时对成分复杂的样品进行定性定量分析，尤其在药理、
临 床研究中是新型有效的方法。质谱法以气态离子为检测对象,检测灵敏度仅与
检测对象的离子化程度密切 相关,而不受其紫外光吸收性质的限制,在紫外末端吸
收物质的测定方面具有独特的优势。
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