北京整容最好的医院临床检验 ABO血型鉴定

2020年11月13日发(作者：江鸿海)
临床检验实验室


ABO血型鉴定
[测定原理]
根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型 、
AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO
血型。所谓正定 型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有
无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是 用已知A细胞和B细胞来
测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。
[试剂和仪器]
1．批批检的抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血
清。
2．批批检的5 ％ A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节
附注；
3．离心机，显微镜。
[标本收集与处理]
1，受检者血清；
2，枸缘酸钠抗凝血或未稍取血，受检者血液制成5 ％红细胞盐水悬液
使用，制备方法见本节附注。
3，标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
[操作步骤]
1．试管法
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(1) 取洁净小试管(内径 10mm×60mm)3支，分别标明抗—A、抗—B和
抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗 —A十B分型血清各l
滴（约50 ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞
盐水悬液1滴，混和。
(2) 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、
B和O型5％试剂红细胞悬液l 滴，混和。
(3) 立即以1000r／min离心 3 min。
(4) 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无
凝集(或溶 血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，
再以低倍镜检查。
(5) 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B
亚型、类B或cisAB的发现。
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(6) 凝集强度判断标准
4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝
集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
2．玻片法
(1) 取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、
抗-B和抗- A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型
血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，
混和。
(2) 另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A细
胞、B 细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用
滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。
(3) 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续
约15 min，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应；再在低倍镜下
观察结果。
[结果判定]
MF
ABO血型正反定型结果
分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细
胞
抗-A 抗-B 抗-A十B
O细胞
十 ─ 十 A ─ 十
─
─ 十 十 B 十 一 ─
─ ─ ─ O 十 十 ─
十 十 十 AB ─ ─
─
注：十为凝集；一为不凝集。
A细胞 B细胞
ABO血型鉴定 版序：2017-6
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[质量控制与附注]
1， 分型血清必须为批批检试剂，且在有效期内使用；质量性能符合要 求。
试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，
以免细菌污染。试剂 开封后有效期为一周。
2， 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1
次，以除却存在于血清中的抗体及可 溶性抗原。或使用合格的商品诊
断红细胞。试剂红细胞有效期：自制的为15天，商品的为试剂有效期。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱
保存，以免细菌污染。试剂开封 后有效期为一周。
3， 生理盐水启用后，有效期为二周。
4， 所有试剂在开封或使用时，必须检查是否有变质；凡可疑者，必须更
换新的试剂进行检测工作。
5，试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
6，操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便
容易核实是否漏加血清。
7，按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为
了防止冷 凝集现象的干扰，一般仍在室温(20—24℃)内进行试验，
37℃可使反应减弱。
8，离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假
阴性结果。
9，观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的
区别。
10，判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。 < br>11，对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应方加入凝聚胺试剂，
以检验不完全抗原的存在 。
12，对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。
13，5%红细胞悬液的配制：用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴）
---------------------------------------- ---------------------
-----
2 1 2ml(40)
5 1
0.8ml(16)
10 1 0.4ml(8)
20 1 0.2ml(4)
ABO血型鉴定
版序：2017-6
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[正反定型结果不一致的原因]
（一） 原因：
有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种：
1， 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可将A
亚型误定为O型，AB型误定为B型。
2， 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误
判为阴性反应。
3， 受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病
或恶性肿瘤：以及类B或ci sAB等。
4，受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验时温度过高，常引
起红细胞呈缗钱状排列。
5，受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏
症。
6，各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性
血型物质中和了相应的抗体.
7，由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的
原因。
8，血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。
9，老年人 血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决办法
如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复 作试验1次。严格执行
操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就
可解决 明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。
（二）检查步骤：
1， 另从受检者采取l份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错
样本造成的不符合。
2，将红细胞洗涤数次，配成5％盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、
抗—Al，抗—A十B及抗H做试 验可以得到其它有用的信息。
3，对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞
已被抗体致敏。
4，用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑
是抗—I，用O型(或ABO相 合的)脐血红细胞检查。
5，如果试验结果未见凝集，应将细胞 及血清试验至少在室温和4℃
放置30min，用显微镜检查核实。
6，如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗—B
血清作吸收及放散试验以及受检者 唾液作A、B、H血型物质测定。
后者只对80％HAB分泌型的人有用。
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7，如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水l滴，混 和，往往可使绢
钱现象消失。应注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞作
试验，以 免使血清中抗体被稀释。
8，如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别
(1) 观察细胞与抗—A及抗— B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗
—B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。
（2） 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身
红细胞上的类B抗原。
(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无
B物质。
(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆
菌感染有关。
9，如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激
活 的T或丁K受体；或产生机制不太明了的丁n受体所引起。多凝集
红细胞具有以下特点：
(1) 能被人和许多家兔的血清凝集。
(2) 能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
(3) 不被脐带血清凝集。
(4) 通常不与自身的血清凝集。
[临床应用]
用于检验人的ABO血型归属。